论著
NR2A、NR2B在慢性胰腺炎大鼠大脑前扣带回的表达变化及意义
NR2AandNR2Bexpressionchangesinanteriorcingulatecortexofchronicpancreatitisratsanditssignificance
周文高峻李桂香李兆申
医院消化内科
目的:检测慢性胰腺炎（CP）大鼠大脑前扣带回(ACC)的N甲基D天冬氨酸受体亚基NR2A和NR2B基因表达水平，探讨其在CP疼痛形成中的作用。方法:成年雄性SD大鼠按数字表法随机分为CP组、对照组和正常组。通过尾静脉一次性注射二丁基二氯化物8mg/kg体重的方法制备CP模型，对照组尾静脉注射等容积乙醇和甘油混合液。4周后依次用不同粗细（3.85、5.50、7.05、10.4、17.8g）的vonfrey纤维丝刺激大鼠腹部，记录疼痛阳性反应次数的百分率。然后处死大鼠，取胰腺组织行病理学检查，采用实时PCR和蛋白质印迹法检测大脑ACC区NR2A、NR2BmRNA及蛋白表达量。结果:CP模型成功率为60%。用Vonfrey纤维丝以3.85g至17.8g递增刺激大鼠腹部，CP组大鼠阳性反应百分率从(38.33±7.53)%递增到(73.33±8.17%)，对照组大鼠从(7.80±6.70)%递增到(34.44±5.27)%，正常组大鼠从(6.57±5.48)%递增到(33.33±5.00)%，均随着刺激强度增强而增加。每个刺激强度CP组大鼠的阳性反应百分率均显著高于对照组及正常组，差异有统计学意义(P值均0.05)，而对照组与正常组间的差异均无统计学意义。CP组、对照组、正常组大鼠ACC区NR2A蛋白表达量分别为1.25±0.78、0.95±0.14、0.91±0.09，NR2B蛋白表达量为1.44±0.12、0.93±0.08、0.94±0.04，CP组显著高于对照组及正常组，差异均有统计学意义（P值均0.01）；NR2AmRNA表达量为1.43±0.20、0.80±0.10、1.01±0.13，NR2BmRNA表达量为1.40±0.09、0.98±0.14、0.94±0.05，CP组显著高于对照组及正常组，差异均有统计学意义（P值均0.01）。结论:CP大鼠大脑ACC区谷氨酸受体NR2A、NR2B的表达上调，可能参与CP疼痛的形成。
纤调蛋白对氧化应激诱导的胰腺星形细胞活化的影响
Effectsofoxidativestressontheactivationofpancreaticstellatecellsthroughtheupregulationoffibromodulin
朱建伟朱惠云蒋斐安薇
医院消化内科
目的:探讨纤调蛋白（FMOD）在氧化应激诱导的胰腺星形细胞（PSCs）活化中的作用。方法:应用靶向FMODshRNA（shFMOD）慢病毒感染PSCs，再用促氧化剂甲萘醌（MND）处理48h（MND+shFMOD组），以等容积DMSO处理的慢病毒感染的PSCs细胞为shFMOD组，亲本细胞为对照组，MND处理的PSCs为MND组。采用RTPCR法检测PSCs活化标志物α平滑肌肌动蛋白（αSMA）、Ⅲ型胶原蛋白α1（Col3α1）、Ⅰ型胶原蛋白α1（Col1α1）、金属蛋白酶抑制剂1（TIMP1）、整合素α1（α1Integrin）mRNA表达。采用二丁基二氯化锡尾静脉注射建立慢性胰腺炎（CP）大鼠模型。应用免疫组织化学染色法检测大鼠正常胰腺组织和CP胰腺组织中FMOD、αSMA及抗氧化标志物超氧化物歧化酶(SOD)、氧化标志物丙二醛(MDA)蛋白表达。结果:shFMOD组PSCs的FMODmRNA表达量较对照组显著下降（0.16±0.03比1），差异有统计学意义(P0.01)，表明FMOD基因沉默成功。MND组PSCs的FMOD、αSMA、Col3α1、Col1α1、TIMP1、α1IntegrinmRNA表达量均较对照组显著增加，而MND＋shFMOD组PSCs的上述各基因表达量均较MND组下降，差异均有统计学意义(P值0.05或0.01)。CP胰腺组织FMOD、αSMA、SOD、MDA蛋白表达均较正常胰腺组织增加，差异具有统计学意义(P值均0.05）。结论:氧化应激通过诱导FMOD表达促进PSCs活化。
cFLIP基因沉默对急性坏死性胰腺炎大鼠的治疗作用及其机制
TherapeuticeffectsofcFLIPgenesilencingonacutenecrotizingpancreatitisratsanditsmechanism
王宝枝汪军彭和平丁榆胡旭中
广州医院普通外科
目的:通过尾静脉注射cFLIPsiRNA治疗急性坏死性胰腺炎（ANP）大鼠，观察疗效，探讨其相关机制。方法:设计并合成3对靶向cFLIP基因的siRNA(cFLIPsiRNA)及阴性对照siRNA（siRNANC），筛选抑制cFLIP基因表达能力最强的siRNA进行实验。30只SD大鼠采用胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠盐溶液方法建立ANP模型，按数字表法随机分为ANP组、siRNANC组、cFLIPsiRNA组，每组10只，分别于尾静脉注射等容积生理盐水、siRNANC、cFLIPsiRNA。24h后处死大鼠，取血检测血清淀粉酶、内毒素水平，取胰腺组织，常规行病理学检查，采用免疫组织化学法和蛋白质印迹法检测胰腺组织cFLIPS、caspase8蛋白表达。结果:ANP组、siRNANC组、cFLIPsiRNA组大鼠血清淀粉酶水平分别为（±）、（±）、（±）U/L，内毒素为（±32）、（±56）、（46±23）ng/L，胰腺病理评分为（4.97±1.16）、（4.92±2.03）、（1.67±1.98）分，cFLIPS蛋白表达量为8.56±2.72、9.12±2.45、3.82±1.46，cFLIPsiRNA组显著低于ANP组及siRNANC组，差异均有统计学意义(P值均0.05)。3组caspase8蛋白表达量分别为2.25±1.24、2.41±1.14、5.56±1.79，cFLIPsiRNA组显著高于ANP组及siRNANC组，差异均有统计学意义（P值均0.05）。而ANP组与siRNANC组间各项指标的差异均无统计学意义。结论:抑制cFLIP基因表达可减轻ANP大鼠胰腺的损伤，机制可能是通过上调caspase8表达抑制胰腺细胞坏死，促进细胞凋亡所致。
急性胰腺炎患者尿液代谢组学分析
Urinemetabolomicsanalysisofpatientswithacutepancreatitis
刘盛兰郭强杨新静孙雪赵大国徐俊陈卫昌
医院重症医学科
目的:检测病情严重程度不同的急性胰腺炎（AP）患者尿液小分子代谢物谱，筛选对AP及其严重程度具有潜在诊断价值的差异代谢物。方法:收集医院65例AP患者，其中中、重症AP(MSAP＋SAP)29例，轻症AP(MAP)36例，以25名健康志愿者作为对照组。采用液相色谱与质谱（LCMS）结合方法检测AP患者及健康对照者尿液中小分子代谢物。采用多元统计分析，构建主成分分析(PCA)及偏最小二乘判别分析(PLSDA)模型并验证，筛选差异代谢物。结果:PCA模型具有很好的可解释度（R2X0.5），各组尿液样本具有较好的区分聚类趋势，获得了较好的分类模型。各组间PLSDA模型的对比使差异进一步凸显，各组样本呈明显的区分聚类，具有较高的可预测性（Q20.7），PLSDA置换检验图提示评估模型可靠有效。AP组与对照组对比，从尿液中筛选出17个差异代谢物，其中壬二酸、琥珀酸半醛、Dβ羟基丁酸、乙酰肉碱、当归酸、癸二酸、马尿酸7个差异代谢物整合对AP的诊断敏感性为%，特异性为94%。对照组、MAP组、MSAP+SAP组两两对比，尿液琥珀酸半醛、Dβ羟基丁酸、乙酰肉碱、苹果酸、当归酸5个差异代谢物整合对SAP的诊断敏感性、特异性均为90%。结论:LCMS代谢组学技术可以有效地识别不同严重程度AP患者尿液代谢物的变化，筛选出的差异代谢物对AP的诊断及分级具有潜在的临床应用价值。
抑制miR29对胰腺癌PANC1细胞生长、侵袭和转移的影响
InhibitingmiR29ongrowth,invasionandmetastasisofPANC1cells
陈栋赵萍陆连芳苏彤任清霞贾巍王全王春阳
医院普通外科
目的:观察抑制miR29对胰腺癌PANC1细胞生长、侵袭和转移能力的影响，探讨其可能机制。方法:以抑制miR29表达的寡核苷酸（antimiR29）及对照寡核苷酸(miRNC)转染PANC1细胞，构建antimiR29PANC1细胞及miRNCPANC1细胞，并采用瞬时转染PUMAsiRNA、EcadherinsiRNA或NCsiRNA方法构建共转染的antimiR29+PUMAsiRNAPANC1细胞及antimiR29+EcadherinsiRNAPANC1细胞。观察各组细胞的克隆形成数，MTT法检测细胞存活率，流式细胞仪检测细胞凋亡，Transwell小室检测细胞侵袭能力，划痕试验检测癌细胞迁移能力。采用antimiR29PANC1细胞皮下注射建立裸鼠移植瘤模型，静脉注射建立肺转移模型，以注射PANC1细胞作为对照。观察移植瘤的生长情况及肺转移结节数量，TUNEL法检移植瘤的细胞凋亡，免疫组织化学法检测移植瘤的PUMA、Ecadherin表达。结果:PANC1、miRNCPANC1、antimiR29PANC1组的细胞存活率分别为%、（96.8±2.8）%、（24.4±3.2）%；细胞克隆形成数为（±36）、（±28）、（37±6）个/倍视野；穿膜细胞数为（56.3±9.6）、（49.8±7.3）、（11.2±3.4）个/倍视野；细胞的迁移距离为（±48）、（±46）、（53±7）μm；细胞凋亡率分别为（1.5+0.9）%、（2.6+0.9）%、（22.4+2.8）%，antimiR29PANC1组细胞与其他2组差异均有统计学意义（P值均0.05）。antimiR29+PUMAsiRNAPANC1组的细胞存活率为（84.7±10.9）%，细胞凋亡率为（1.3±0.8）%；antimiR29+EcadherinsiRNAPANC1的穿膜细胞数为（49.7±6.4）个/倍视野，细胞迁移距离为（±36）μm，均消除抑制miR29表达对PANC1细胞所带来的影响（P值均0.05）。PANC1、antimiR29PANC1细胞移植瘤的体积分别为（±）、（±）mm3，细胞凋亡指数为0.93±0.14、8.26±1.15，肺转移结节为（26.4±6.5）、（8.6±2.7）个，PUMA阳性表达率为（7.2±1.6）%、（43.8±7.6）%，Ecadherin阳性表达率为（8.3±3.6）%、（47.4±5.7）%。antimiR29PANC1组移植瘤体积、肺转移结节较对照组显著减小或减少，而细胞凋亡、PUMA及Ecadherin表达显著增加，差异均有统计学意义（P值均0.05）。结论:抑制miR29表达后PANC1细胞的增殖、侵袭、转移能力下降，其机制可能与上调PUMA及Eadherin表达有关。
小视野高分辨DWI对胰腺实性病变的鉴别诊断价值
ValueofreducedfieldofviewDWIindifferentiatingsolidpancreaticfocallesions
李晶马超边云王馨蕊史张王莉邵成伟陈士跃陆建平
医院放射科
目的:探讨小视野高分辨扩散加权成像（rFOVDWI）对胰腺实性占位的鉴别诊断价值。方法:收集例胰腺实性占位患者，其中胰腺导管腺癌（PDAC）例，神经内分泌肿瘤（NET）16例，肿块型慢性胰腺炎（MFCP）7例，实性假乳头状瘤（SPT）11例。招募38名健康成年志愿者作为对照组。行包括单次激发平面回波成像（ssEPI）DWI、rFOVDWI（b值为0和s/mm2）的MRI检查。采用四分法从解剖结构的可视性、胰腺病灶对比度、运动及磁敏感伪影3方面评估rFOVDWI及ssEPIDWI图像质量，通过工作站自带软件测量感兴趣区（ROI）的表观扩散系数（ADC）值。比较两种DWI的图像质量及ADC值在各胰腺疾病及正常胰腺间的差异。绘制ADC值的受试者工作特征（ROC）曲线，评价PDAC与其他胰腺良性肿块及正常胰腺的差异。结果:b值为0和s/mm2的rFOVDWI在显示胰腺解剖结构、病灶对比度、伪影评分均优于ssEPIDWI(b=0s/mm2时为2.99±0.51比2.79±0.64、2.37±0.48比1.81±0.63、3.17±0.56比2.91±0.60；b=s/mm2时为3.63±0.50比3.32±0.56、3.45±0.50比3.01±0.49、3.74±0.44比3.12±0.37)，差异均有统计学意义（P值均0.）。PDAC、NET、MFCP、SPT、正常胰腺rFOVDWI获得的ADC值分别为（1.38±0.17）×10-3、（1.22±0.35）×10-3、（1.29±0.13）×10-3、（1.04±0.38）×10-3、（1.86±0.15）×10-3mm2/s；ssEPIDWI的ADC值分别为（1.73±0.24）×10-3、（1.63±0.39）×10-3、（1.58±0.19）×10-3、（1.25±0.26）×10-3、（2.04±0.20）×10-3mm2/s，各组间的差异及同组内两ADC值间的差异均有统计学意义（P值均＜0.）。MFCP与PDAC、NET与MFCP、MFCP与SPT间rFOWDWI的ADC值的差异及MFCP与PDAC、PDAC与NET、SPT与MFCP间ssEPIDWI的ADC值差异无统计学意义，而其他两两组间差异均有统计学意义（P值均＜0.05）。PADC与正常胰腺rFOVDWI和ssEPIDWI的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.（95%CI0.～0.）和0.（95%CI0.～0.），差异有统计学意义（P=0.），而PDAC与所有良实性病变的rFOVDWI和ssEPIDWI的ADC值的AUC分别为0.（95%CI0.～0.）和0.（95%CI0.～0.），差异无统计学意义。结论:rFOVDWI显著提高DWI图像质量，并且对胰腺导管腺癌的诊断效能更佳。
基于三维Dixon磁共振成像的胰腺计算机辅助分割可行性研究
Feasibilityof